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組織透明化(VA-044)全腦動態(tài)3D掃描

播放:626          上傳時(shí)間:2019-08-01

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VA-044

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于脂質(zhì)提取的聚合物引發(fā)劑

 

  一個世紀(jì)以來,生物學(xué)家們一直夢想著能夠透過器官甚至整個機(jī)體,親眼看到細(xì)胞連接和精細(xì)結(jié)構(gòu),現(xiàn)在隨著組織透明化技術(shù)的完善,這一夢想終于成為了現(xiàn)實(shí)。

 

◆原理

  VA-044 作為組織透明化技術(shù)中起關(guān)鍵作用的水溶性偶氮引發(fā)劑,普遍適用于高分子合成的水溶液聚合與乳液聚合。在CLARITY 方法中,VA-044 作為引發(fā)劑,催化丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和PFA 形成水凝膠。

  2013 年3 月,斯坦福大學(xué)的Karl Deisseroth 博士領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)在自然雜志(Nature)上發(fā)表了Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的論文,文中介紹了制備組織的方法CLARITY。該方法是將組織浸透在水凝膠單體溶液中(Hydrogel Monomer Solution)中,經(jīng)電泳使組織呈現(xiàn)透明。這種水溶膠—組織雜交的方式可以維持組織的原有結(jié)構(gòu),使生物分子結(jié)合到水凝膠的網(wǎng)孔上。重要的是脂類不會結(jié)合到水凝膠上,因而可以通過這種方式將脂類有效去除。通過這種方法制備的組織樣品可用于后期的影像實(shí)驗(yàn),免疫染色,原位雜交等實(shí)驗(yàn)。

  CLARITY可用于熒光蛋白質(zhì)和抗體的免疫染色,可作為解析腦神經(jīng)回路的有效工具。VA-044是論文實(shí)驗(yàn)步驟中透明化工程的使用試劑。

 

◆特點(diǎn)• 優(yōu)勢

 操作簡單,固定蛋白后只需進(jìn)行電泳;

 可保持組織、器官和全身結(jié)構(gòu)的完整性;

 可進(jìn)行原位雜交和免疫組化實(shí)驗(yàn),可進(jìn)行多輪染色和脫色步驟;

 

◆案例•應(yīng)用

Clarity 介紹

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PARS 介紹

  2014 年7 月,加州理工學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞雜志(Cell)上發(fā)表論文Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing,將CLARITY 技術(shù)推進(jìn)到一個新的高度——全身組織透明化技術(shù),稱為PARS(Perfusion-assisted Agent Release in Situ)。這種技術(shù)將透明劑持續(xù)泵入動物的循環(huán)系統(tǒng)從而進(jìn)入各個組織,或者通過腦脊液管道泵入大腦,再去除脂質(zhì),使器官和生物體被高分子滲透而呈現(xiàn)透明,并可用熒光抗體分析和揭示具有完整連接性的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和三維細(xì)胞排列。

 

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圖A. PARS 建立的小鼠透明化腸,并用凝集素(lectin)

亞甲基藍(lán)(methylene blue)、DAPI 進(jìn)行免疫標(biāo)記后成像 

并獲得三種免疫標(biāo)記的疊加圖(merge)

圖B. PARS 建立的小鼠透明化腎臟并用抗微管蛋白抗體

和DRAQ5 進(jìn)行免疫標(biāo)記后成像,并獲得兩種免疫

標(biāo)記的疊加圖   

 

CLARITY處理的小鼠腦

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CLARITY處理的小鼠大腦成像

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CLARITY處理的Thy1-YFP(H Line)小鼠大腦的熒光觀察
(A)從大腦皮質(zhì)到海馬的3-D觀察圖像
(B)大腦皮層Ⅴ層的錐體細(xì)胞的樹突圖像
拍攝條件:雙光子   使用設(shè)備:Olympus FV1000直立顯微鏡,25倍浸液物鏡

 

CLARITY+抗體處理的小鼠大腦成像

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CLARITY處理后,用Iba1抗體染色Thy1-YFP(H線)小鼠大腦的熒光觀察
(A)在大腦皮質(zhì)的小膠質(zhì)細(xì)胞的3-D觀察圖像
(B)從表面層觀察皮質(zhì)Ⅰ層的圖像
拍攝條件:單光子   使用設(shè)備:Olympus FV1000直立顯微鏡,25倍浸液物鏡

 

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱規(guī)格包裝
223-02112VA-044細(xì)胞生物學(xué)25 g
225-02111VA-044細(xì)胞生物學(xué)100 g
227-02115VA-044細(xì)胞生物學(xué)500 g
019-19741

Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)

小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞特異性蛋白抗體(免疫組化)

免疫化學(xué)用50 μg

 

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